ในการศึกษาล่าสุดที่โพสต์ไปยัง เซิร์ฟเวอร์ bioRxiv * preprint นักวิจัยได้ประเมินประสิทธิภาพของยาโมเลกุลขนาดเล็กในการต่อต้านไวรัสโคโรนา 2 (SARS-CoV-2) ในกลุ่มอาการทางเดินหายใจเฉียบพลันรุนแรงในหลอดทดลอง

ก่อนหน้านี้ ผู้เขียนของการศึกษาปัจจุบันแสดงให้เห็นว่าระดับไทเทอร์ของโปรตีนอิมมูโนโกลบูลิน G (IgG) ที่ต้าน SARS-CoV-2 S (spike) มีส่วนเกี่ยวข้องอย่างมากในการติดเชื้อ SARS-CoV-2 ที่รุนแรง เนื่องจากพวกมันกระตุ้นการกระตุ้นของมาโครฟาจมากเกินไป ทำลายความสมบูรณ์ของเยื่อบุผนังหลอดเลือด และกระตุ้น การก่อตัวของลิ่มเลือด การตอบสนองการอักเสบที่มากเกินไปขึ้นอยู่กับ titers ของ anti-S IgG ที่มี glycosylation บริเวณหางที่ผิดปกติ (Fc) บาคาร่า การพัฒนายาที่สามารถต่อต้านการอักเสบที่มากเกินไปซึ่งเกิดจากแอนติบอดี ควบคู่ไปกับการลดการยับยั้งการตอบสนองของภูมิคุ้มกันต่อต้านโรคซาร์ส-โควี-2 อาจทำให้แนวการรักษาของโรคติดเชื้อไวรัสโคโรนา 2019 (COVID-19) กว้างขึ้นได้

ในการศึกษาครั้งนี้ นักวิจัยระบุตัวยับยั้งโมเลกุลขนาดเล็กที่ต่อต้านการตอบสนองของการอักเสบที่รุนแรงซึ่งเกิดจากแอนติบอดีในการติดเชื้อ SARS-CoV-2 ที่รุนแรงการทดสอบการกระตุ้นด้วยแมคโครฟาจซึ่งมีความสามารถในการประเมินประสิทธิภาพและศักยภาพของสารประกอบต่อการตอบสนองต่อการอักเสบที่กำหนดเป้าหมายต่อต้าน S ได้รับการพัฒนาและใช้เพื่อคัดกรองโมเลกุลตัวยับยั้งโมเลกุลขนาดเล็กที่ได้รับอนุญาตจากการตรวจสอบ ความสามารถในการคัดเลือกและศักยภาพต่อการอักเสบรุนแรงที่ต้าน S-mediated นั้นวัดตามค่า IC 50 (ความเข้มข้นยับยั้งครึ่งหนึ่งสูงสุด) สำหรับการเปิดใช้งานของแมคโครฟาจ M-CSF (ปัจจัยกระตุ้นมาโครฟาจ-โคโลนี) และ il=10 (อินเตอร์ลิวคิน 10)-MDAMs ที่แตกต่างกัน (มาโครฟาจคล้ายถุงมาโครฟาจที่ได้มาจากโมโนไซต์) การตอบสนองต่อการอักเสบของแมคโครฟาจได้รับการประเมินตามการแสดงออกของ IL-6

ประสิทธิภาพของ SYK (spleen-associated tyrosine kinase) ตัวยับยั้งโมเลกุลขนาดเล็ก, entospletinib และ R406 (fostamatinib"s activated form) และ phosphoinositide 3‑kinase (PI3K) inhibitor เทียบกับ dexamethasone สร้างไทเทอร์ Anti-S IgG ซึ่งทีมบ่มเพาะ SARS-CoV-2 S ด้วยตัวอย่างซีรั่มที่เก็บจากผู้ป่วย COVID-19 ที่รักษาในโรงพยาบาลที่ศูนย์การแพทย์มหาวิทยาลัยอัมสเตอร์ดัม (UMC) ซึ่งติดเชื้อ SARS-CoV-2 Wuhan- สายพันธุ์ Hu-1 ได้รับ Sera ระหว่างเข้ารับการรักษาในหอผู้ป่วยหนัก (ICU) การค้นพบนี้ได้รับการตรวจสอบความถูกต้องใน การทดลอง ex vivo BAL (bronchoalveolar lavage) - เปิดใช้งาน macrophages ของ pulmonary alveoli ในปอดของมนุษย์

นอกจากนี้ HPMVECs (เซลล์บุผนังหลอดเลือดขนาดเล็กในปอดของมนุษย์) ได้รับการรักษาด้วย MDAMS ที่เปิดใช้งาน และติดตามความต้านทานไฟฟ้าของ HPMVEC trans-endothelial ผลของยาโมเลกุลเล็กที่มีศักยภาพในแหล่งกำเนิดการก่อตัวของลิ่มเลือดได้รับการทดสอบโดยการเพิ่มเกล็ดเลือดให้กับ HPMVECs ที่กระตุ้นด้วยตัวกลางที่ปรับสภาพด้วยมาโครฟาจ การยึดเกาะของเกล็ดเลือดได้รับการประเมินอันเดอร์โฟลว์ไปยัง von Willebrand factor (vWF)- และคอมเพล็กซ์ภูมิคุ้มกัน IgG ที่กำหนดเป้าหมาย S ซึ่งก่อรูปขึ้นโดย COVA1-18 ซึ่งเป็นรีคอมบิแนนต์ mAb (โมโนโคลนอลแอนติบอดี) ซึ่งแสดงไทเทอร์ต้าน S IgG ที่มีไกลโคซิเลชันผิดปรกติ (78% และกาแลคโตซิเลต 9 เปอร์เซ็นต์ และ fucosylated ตามลำดับ ทีมตรวจสอบการตอบสนองการอักเสบมากเกินไปที่เกิดจากคอมเพล็กซ์ภูมิคุ้มกันต่อต้าน S IgG ของความกังวล (VOCs) ของ SARS-CoV-2 ต่างๆ เช่น Alpha, Beta, Gamma และ Delta VOCs และ Wuhan-Hu-1 ความเครียด.

สารยับยั้ง PI3K และ SYK หลายตัวต่อต้านการอักเสบที่สื่อกลางโดยคอมเพล็กซ์ภูมิคุ้มกันต่อต้าน S Entospletinib ซึ่งเป็นสารยับยั้ง SYK ได้รับการระบุว่าเป็นยาที่มีแนวโน้มดีที่สุดในการต่อสู้กับการอักเสบรุนแรงที่เกิดจากสารต้าน SARS-CoV-2 S IgG การหยุดชะงักของความสมบูรณ์ของสิ่งกีดขวางบุผนังหลอดเลือด การยึดเกาะของเกล็ดเลือด และการก่อตัวของลิ่มเลือด นอกจากนี้ เอนโทสพลีทินิบยังยับยั้งการอักเสบที่มากเกินไปของสารต้าน S IgG ที่เกิดจาก SARS-CoV-2 VOCs หลายชนิด Entospletinib และ R406 สามารถยับยั้งการอักเสบของ S ได้มากกว่า dexamethasone

Entospletinib ไม่แสดงผลกระทบต่อ polyinosinic:polycytidylic acid [poly(I:C)]-alone เซลล์ macrophage ที่ถูกกระตุ้น สารยับยั้ง PI3K ต้องการความเข้มข้นที่มากกว่า (เกิน 10.0 ไมโครโมลาร์) มากกว่าสารยับยั้ง SYK เพื่อยับยั้ง 80% ของการต่อต้าน S IL-6 และในบรรดาสารยับยั้ง PI3K นั้น Alpelisib ลดการแสดงออกของ IL-6 ลงอย่างมีประสิทธิภาพที่สุด Duvelisib ซึ่งเป็นสารยับยั้ง PI3K-Gamma/Delta ลดการแสดงออกของ IL-6 เมื่อกระตุ้นร่วมกันของสารเชิงซ้อนภูมิคุ้มกันต่อต้าน S และ polyinosinic:polycytidylic โมเลกุลขนาดเล็กเพิ่มการผลิต IL-6 ในลักษณะที่ขึ้นกับขนาดยาใน polyinosinic:polycytidylic acid -เงื่อนไขเท่านั้น.

ตัวยับยั้ง PI3K-Delta อีกตัว idelalisib ปรับสมดุลการแสดงออกของ IL-6 ที่ต่อต้าน S-mediated โดยไม่มีผลต่อการตอบสนองของ anti-SARS-CoV-2 ที่ความเข้มข้นมากที่สุดสองความเข้มข้น ความสามารถในการมีชีวิตที่ลดลงและการแสดงออกของ IL-6 ที่เพิ่มขึ้นในสภาวะที่เป็นกรดพอลิอิโนซินิกเท่านั้นถูกสังเกตพบ การค้นพบนี้บ่งชี้ว่าสารยับยั้ง SYK มีศักยภาพมากกว่าโมเลกุลของสารยับยั้ง PI3K สารยับยั้ง PI3K และ SYK แสดงปฏิกิริยาตอบโต้การอักเสบแบบเลือกข้างมากกว่าเดกซาเมทาโซน Entospletinib และ R406 ยับยั้งการแสดงออกของ anti-S IL-6 ซึ่งลดการแสดงออกของไซโตไคน์ไปสู่ความเข้มข้นของสภาวะกรดโพลีอิโนซินิก:โพลีไซติดไดลิก จากการกระตุ้นคอมเพล็กซ์ภูมิคุ้มกันที่ได้มาจากซีรั่ม สารยับยั้ง SYK ทั้งสองแสดง การยับยั้งภายนอก ร่างกายและ การ ยับยั้งในหลอดทดลอง ที่เทียบเคียงได้Entospletinib ได้ทำการคัดเลือกผู้ไกล่เกลี่ยที่สร้างความเสียหายต่อสิ่งกีดขวางบุผนังหลอดเลือดที่ผลิตโดยแมคโครฟาจเมื่อกระตุ้นโดย SARS-CoV-2 และสารเชิงซ้อนภูมิคุ้มกันต่อต้าน S ที่ได้รับจากซีรั่ม เซลล์เม็ดเลือดขาวเกาะติดในระดับที่น้อยกว่ากับ HPMVECs ที่สัมผัสกับอาหารเลี้ยงเชื้อซึ่งประกอบรวมด้วยมาโครฟาจที่รักษาด้วยเอนโตสเลตินิบภายใต้โพลีอิโนซินิก:กรดโพลีไซตีไดลิกและซีรั่มกระตุ้นร่วม คอมเพล็กซ์ภูมิคุ้มกัน glycosylated ผิดปรกติประสานการยึดเกาะของ thrombocyte กับ vWF Entospletinib ถ่วงดุลการก่อตัวของลิ่มเลือดที่เพิ่มขึ้นและลดปริมาณของก้อนลิ่มเลือดให้เท่ากับการควบคุม COVA1-18 mAb Entospletinib และ R406 ลดการแสดงออกของ IL-6 ลง 75% ถึง 95% เทียบกับ VOCs ทั้งหมด

โดยรวมแล้ว ผลการศึกษาแสดงให้เห็นว่าการปิดล้อมสัญญาณ SYK เป็นกลยุทธ์ที่มีประสิทธิภาพในการต่อต้านการกระตุ้นมากเกินไปของถุงลมขนาดใหญ่ที่เกิดจากซีรั่มที่ได้รับจากคอมเพล็กซ์ภูมิคุ้มกัน พบว่า Entospletinib เป็นตัวยับยั้ง SYK ที่มีแนวโน้มดีที่สุดในการต่อต้าน COVID-19 ที่รุนแรง